MC1061F- Chemically Competent Cell

基因型：

araD139 Δ (araA-leu)7697 Δ(lac)X74 galK16 galE15(GalS)lambda- e14- mcrA0 relA1 rpsL150(StrR) spoT1 mcrB1 hsdR2

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

MC1061F-菌株來(lái)源于E.coli B/r型SB3118菌株，同時(shí)也是DH10b及TOP-10的母本菌株。MC1061F-化轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率ji高，可用作實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)質(zhì)粒構(gòu)建及噬菌體展示實(shí)驗(yàn)，但缺乏F`因子，不能用于絲狀噬菌體（比如M13）的感染。不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶對(duì)質(zhì)粒的污染。此菌株具有l(wèi)ian霉素抗性。 MC1061F-感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2×109 cfu/μg DNA。

操作說(shuō)明：

1. MC1061F-感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。 

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。 

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。