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當前位置:首頁   >  產(chǎn)品中心  >  Abnbio感受態(tài)細胞  >  表達 感受態(tài)細胞  >  ABG212-50Rosetta-gami B(DE3) 感受態(tài)細胞

Rosetta-gami B(DE3) 感受態(tài)細胞

簡要描述:Rosetta-gami B(DE3) 感受態(tài)細胞 保存條件:-80℃ 基因型F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10 trxB pRARE (Camr, Kanr, Tetr)

  • 產(chǎn)品型號:ABG212-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:336

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG212-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細胞應用領(lǐng)域環(huán)保,食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

基因型

F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10 trxB pRARE (Camr, Kanr, Tetr)


簡要說明

Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了BL21,Tuner,Origami和Rosetta 四種菌株的優(yōu)點: lacY1基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變賦予其Tuner菌株的優(yōu)點——IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞,產(chǎn)生更加嚴格、均一的濃度依賴。 pRARE賦予其Rosetta菌株的優(yōu)點——補充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子(AUA, AGG,AGA, CUA,CCC,GGA)對應的tRNA,提高外源基因的表達水平。 gor522::Tn10 trxB賦予其Origami菌株的優(yōu)點——突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷guang甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor)基因,它們是還原途徑的兩個關(guān)鍵酶,其突變有利于高效形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白,增強蛋白的可溶性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3 區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA 聚合酶)適合T7 啟動子誘導的蛋白表達。* Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡na霉素,lu霉素,四環(huán)素抗性,由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達108 cfu/μg DNA。


操作說明

1、Rosetta-gami B(DE3)菌株感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手撥EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項

1、感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)粒時應輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

4.誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。

5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。








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